Ponente
Descripción
Resumen
El Pembrolizumab (Keytruda®) es el líder de los anticuerpos monoclonales (AcM) para la terapia del cáncer respecto a las indicaciones aprobadas y las ventas de mercado. El Centro de Inmunología Molecular (CIM) desarrolló un biosimilar de pembrolizumab en la línea celular CHOK1. El objetivo de esta investigación es analizar la influencia de los cambios en el medio de cultivo sobre las características físico-químicas y biológicas del AcM. En este estudio se emplearon muestras obtenidas a partir del sobrenadante del cultivo en simulación de perfusión, con cinco condiciones que difieren en el porcentaje de medio de incremento comercial adicionado a un medio basal del CIM; se purificaron mediante: cromatografía de afinidad por proteína A seguida de cromatografía de exclusión molecular. La pureza y la agregación se examinó mediante la electroforesis desnaturalizante en geles de poliacrilamida en condiciones reductoras y no reductoras, la cromatografía de exclusión molecular y la dispersión dinámica de la luz; la identidad mediante el Western Blot y el perfil de isoformas obtenido por isoelectroenfoque capilar de imagen. La capacidad del anticuerpo para inhibir la unión al ligando PD-L1 se evaluó mediante un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas de competencia. Se detectaron pequeños agregados asociados a la variabilidad del proceso de purificación. Las isoformas cambiaron con el aumento del medio de incremento, disminuyendo por lo general las menos básicas. Las potencias relativas oscilaron entre 82–102 %, sin demostrarse dependencia entre el aumento del porcentaje de medio de incremento y la actividad biológica. Los resultados evidenciaron que la heterogeneidad de carga es la característica más afectada.
Palabras clave: pembrolizumab, medio de cultivo, características físico-químicas y biológicas.
Abstract
Pembrolizumab (Keytruda®) is the leading monoclonal antibody (mAb) in cancer therapy in terms of approved indications and market sales. The Center for Molecular Immunology (CIM) developed a pembrolizumab biosimilar using the CHO-K1 cell line. The objective of this study was to analyze the influence of changes in the culture medium on the physicochemical and biological characteristics of the mAb. In this study, samples obtained from the culture supernatant under perfusion simulation were used, with five conditions differing in the percentage of a commercial feed medium added to a CIM basal medium. The samples were purified in two steps: protein A affinity chromatography followed by size-exclusion chromatography. Purity and aggregation were assessed by denaturing polyacrylamide gel electrophoresis under reducing and non-reducing conditions, size-exclusion chromatography, and dynamic light scattering. Identity was evaluated by Western blot, and isoform profiles were determined by imaged capillary isoelectric focusing. The antibody’s ability to inhibit binding to the PD-L1 ligand was evaluated using a competitive enzyme-linked immunosorbent assay. Small aggregates were detected in the samples, consistent with variability in the purification process. Isoforms showed noticeable changes with increasing percentages of feed medium; in general, the less basic species decreased as the proportion of feed medium increased. Relative potencies ranged from 82–102%, with no demonstrated dependence between increasing feed medium percentage and biological activity. The results indicated that charge heterogeneity was the most affected attribute.
Keywords: pembrolizumab, culture medium, physicochemical and biological characteristics.