Ponente
Descripción
Introducción: La muteina IL2 no-alfa (IL2na) es una proteína no glicosilada de 18 kDa producida en E. coli, que presenta baja solubilidad y alta propensión a la agregación, presentando desafíos significativos para su fabricación y estabilización. Objetivo: Realizar caracterización biofísica de la naIL2 y selección de aditivos estabilizantes. Materiales y métodos: El estado oligomérico y los agregados solubles se caracterizaron mediante dispersión dinámica de luz (DLS) y cromatografía de exclusión por tamaño. La estabilidad conformacional y coloidal se evaluó mediante fluorescencia intrínseca con rampa térmica y DLS, respectivamente. La carga superficial en función del pH se determinó por dispersión de luz electroforética. La selección de azúcares, aminoácidos y surfactantes estabilizantes se realizó bajo diferentes condiciones de pH y concentración de tampón a temperaturas de estrés elevadas. Resultados: La naIL2 presento agregados solubles con diámetro hidrodinámico medio de 27,4 nm e índice de polidispersidad de 0,123 a pH 4. Se observó una transición conformacional a 68 °C y aglomeración a 80 °C. El punto isoeléctrico se determinó en pH 8,2. El dodecilsulfato sódico fue el único surfactante capaz de solubilizar naIL2 a pH 7 y de disociar parcialmente sus agregados a pH 4. La estabilización de los agregados solubles tras almacenamiento a temperaturas elevadas se logró a pH 4 en presencia de sorbitol, manitol, prolina y glicina. Conclusiones: Este estudio constituye la base inicial para identificar las condiciones de formulación óptimas de la muteina IL2na, por lo que aún se requieren estudios adicionales para diseñar estrategias que controlen su agregación.