Ponente
Descripción
Introducción. La peste porcina clásica (PPC) es una enfermedad vírica altamente contagiosa, asociada a elevada morbilidad y mortalidad en cerdos domésticos y silvestres. Su agente etiológico, el virus de la peste porcina clásica (VPPC), es un pestivirus envuelto (Flaviviridae). Dadas las severas pérdidas económicas en la porcicultura, se han desarrollado vacunas basadas en la glicoproteína estructural E2. Recientemente, se ensayó una vacuna de subunidades recombinantes que fusiona E2 con la molécula CD154 porcina (E2-CD154) como inmunomodulador. Objetivos. Identificar y caracterizar la estructura primaria de E2-CD154, incluyendo el mapeo de puentes disulfuro, la determinación de sitios de N- y O-glicosilación, y otras modificaciones postraduccionales (PTM). Materiales y Métodos. Se emplearon digestiones enzimáticas en tándem en solución y MED-FASP con Lys-C/tripsina, previa desglicosilación, reducción y alquilación. Adicionalmente, se usaron Glu-C, Lys-C y tándem Lys-C/Glu-C. Los péptidos fueron desalados con resinas C8 y ZipTip C18, y analizados por espectrometría de masas TIMS-TOF MS. La identificación peptídica se realizó con los algoritmos PEAKS y Spider. Resultados. E2-CD154 fue identificada con la mayor puntuación; en tercer lugar, se detectó Q95MQ5/CD40L_PIG. Los extremos N- y C-terminales se obtuvieron íntegros. La PNGasa F reveló sitios de N-glicosilación por desamidación de Asn en motivos N-X-S/T en posiciones 174, 179, 243, 287, 318, 355 y 613. Se identificaron sitios de O-glicosilación en T101, S393, S527, S528, T530 y S545. Conclusiones. La búsqueda con PEAKS permitió la identificación inequívoca de E2-CD154, alcanzando una cobertura de secuencia del 94%, lo que valida su integridad estructural y perfil de glicosilación.
Palabras Claves: E2CD154, Peste Porcina Clásica, espectrometría de masas, TIMS-TOF MS.