Ponente
Descripción
Los liposomas constituyen plataformas versátiles para la encapsulación y presentación de antígenos vacunales. Sin embargo, la determinación precisa de la eficiencia de encapsulación (EE) de proteínas marcadas con fluoróforos requiere un método de lisis estandarizado que garantice la liberación total del contenido liposomal sin interferir con la señal fluorimétrica. En este estudio se compararon dos agentes disruptores, tritón X-100 y etanol, sobre liposomas de dipalmitoilfosfatidilcolina:colesterol (DPPC:Col, 1:1, mol:mol) que encapsulan las proteínas DEC-Her1, DEC-Her2 y StII marcadas con isotiocianato de fluoresceína. Se evaluaron el diámetro hidrodinámico, el índice de polidispersidad, el potencial zeta, el pH, la cinética de fluorescencia y la EE mediante dispersión dinámica de la luz y fluorimetría en placas. El tratamiento con tritón X-100 redujo el diámetro a ~9–10 nm independientemente de la concentración, con un índice de polidispersidad de 0,12 a 5%, compatible con la formación de micelas mixtas lípido:detergente. En contraste, el etanol no modificó el diámetro promedio de las vesículas, pero indujo partículas >1000 nm, acidificación del medio y liberación rápida del contenido liposomal. El perfil de liberación relativa con tritón X-100 al 5% se ajustó a un modelo de meseta exponencial. Se concluye que el etanol no resulta adecuado como agente disruptor; en tanto, el tritón X-100 al 5% con 10 min de incubación, constituye el protocolo óptimo para determinar la EE en este sistema liposomal, ofreciendo mayor liberación, cinética predecible y ausencia de agregados.