Ponente
Descripción
La protoporfirinógeno oxidasa (PPO) es una enzima que cataliza la oxidación del protoporfirinógeno IX a protoporfirina IX en la vía de los tetrapirroles responsable de la síntesis de clorofila y hemo (Matringe et al., 1992a). Se han identificado dos isoformas de la PPO en plantas terrestres: PPO1 y PPO2. La PPO1 es la más abundante y se localiza en los cloroplastos. Con respecto a la PPO2, existen estudios divergentes en cuanto a la localización subcelular. La isoforma PPO2 ha sido reportada en la envoltura de los cloroplastos y la mitocondria en Spinacia oleracea, mientras que en Nicotiana tabacum se encontró solamente en las mitocondrias (Lermontova et al., 1997). La determinación de la localización subcelular contribuirá a la clarificación de la función de esta isoforma y a entender el control de la ruta. El objetivo de nuestro trabajo es determinar la localización subcelular de las isoformas de la PPO en tabaco (NtPPO1 y NtPPO2). Se desarrollaron líneas de tabaco transgénicas que sobreexpresan PPO1 (Nt-OE-PPO1) y PPO2 (Nt-OE-PPO2) mediante transformación estable facilitada por Agrobacterium tumefaciens. A partir de estas líneas, se aislaron fracciones subcelulares de mitocondria, cloroplasto, tilacoides y envoltura para estudiar la localización de ambas isoformas. Las líneas de tabaco transgénicas sobreexpresaron la PPO1 o PPO2 en la generación T1 a nivel de ARN, proteína y actividad enzimática. Se concluye que NtPPO1 se localiza en tilacoides, mientras que NtPPO2 se encuentra en la envoltura de los cloroplastos de tabaco. Se excluye la localización mitocondrial discutida ampliamente para esa isoforma.
