Ponente
Descripción
Resumen
Introducción: Para la aprobación de los productos biofarmacéuticos parenterales, las agencias reguladoras nacionales e internacionales exigen la determinación de endotoxinas bacterianas por el método del Lisado de Amebocitos de Limulus. Actualmente, los reactivos se obtienen del amebocito de cangrejos herradura, especie que se encuentra en extensión. Para dar continuar de los ensayos existe la alternativa del reactivo recombinante PyroSmart NextGen®, el cual debe ser evaluado como sustituto. Objetivo: Establecer una metodología para evaluar el reactivo recombinante PyroSmart NextGen® como posible alternativa para determinar la concentración de endotoxinas bacterianas en muestras de proceso y producto terminado. Materiales y Métodos: Los materiales utilizados son estériles y apirogénicos. La metodología aplicada incluyó el análisis de los parámetros de control de los ensayos y la evaluación de muestras con reactivos natural y recombinante. El ensayo se realizó según capítulos 85 y 86 de la farmacopea americana y fue ejecutado bajo cumplimiento de las Buenas Prácticas de Laboratorio. Resultados: Los ensayos realizados cumplen los criterios de aceptación: coeficiente de correlación lineal ≥ 0,980 y la concentración de endotoxinas del blanco es inferior a la menor concentración de la curva de referencia. La recuperación de endotoxinas está dentro del rango de aceptación (50-200%) y la variabilidad en el resultado de las muestras cumple el criterio de validez: ± 2. Conclusiones: El reactivo PyroSmart NextGen® puede utilizarse para la determinación de endotoxinas bacterianas, siendo necesaria la validación del método para todas las muestras objeto de análisis.
Palabras clave: juego de reactivos PyroSmart NextGen®, endotoxinas bacterianas.
Abstract
Introduction: For the approval of parenteral biopharmaceutical products, national and international regulatory agencies require the determination of bacterial endotoxins by the Limulus Amebocyte Lysate method. Currently, the reagents are obtained from the amebocytes of horseshoe crabs, a species that is widespread. To continue the tests, there is the alternative of the PyroSmart NextGen® recombinant reagent, which must be evaluated as a substitute. Objective: Establish a methodology to evaluate the PyroSmart NextGen® recombinant reagent as a possible alternative to determine the concentration of bacterial endotoxins in process and finished product samples. Materials and Methods: The materials used are sterile and non-pyrogenic. The applied methodology included the analysis of the control parameters of the assays and the evaluation of samples with natural and recombinant reagents. The test was carried out according to chapters 85 and 86 of the American Pharmacopeia and was carried out in compliance with Good Laboratory Practices. Results: The tests carried out meet the acceptance criteria: linear correlation coefficient ≥ 0.980 and the endotoxin concentration of the blank is lower than the lowest concentration of the reference curve. The recovery of endotoxins is within the acceptance range (50-200%) and the variability in the results of the samples meets the validity criterion: ± 2. Conclusions: The PyroSmart NextGen® reagent can be used for the determination of bacterial endotoxins, and validation of the method is necessary for all samples under analysis.
Keywords: PyroSmart NextGen® reagent kit, bacterial endotoxins.