Ponente
Descripción
Introducción: En el Centro de Inmunología Molecular, el N-acetil-gangliósido M3 (NAcGM3) asociado a complejo de proteínas de vesículas de membrana externa de Neisseria meningitidis (VSSP, Very small size particle), se desarrolla como adyuvante de vacunas para el tratamiento del cáncer renal metastásico, para esto es necesario contar con un proceso productivo que sea eficiente, consistente y reproducible. La producción de las nanopartículas de NAcGM3/VSSP comprende varias etapas, siendo la ultrafiltración/diafiltración y ultracentrifugación las de menor rendimiento. Es importante la capacidad del proceso de obtener nanopartículas homogéneas. La determinación de gangliósidos y proteínas son controles esenciales para la evaluación del desempeño del proceso y de la homogeneidad de las nanopartículas.
Objetivos: Determinar la concentración de gangliósido y proteínas en los diferentes pasos del proceso de obtención del NAcGM3/VSSP sintético y evaluar la homogeneidad en gradiente de centrifugación en sacarosa discontinuo.
Materiales y métodos: Para la determinación de la concentración de gangliósidos y proteínas se emplearon los métodos de Svenerholm (ácido siálico) y Lowry, respectivamente. Se trabajó con 3 lotes experimentales, se tomaron muestras en las etapas de solubilización y mezclado, ultrafiltración/diafiltración y ultracentrifugación y a partir de un gradiente de centrifugación en sacarosa discontinuo, para homogeneidad.
Resultados y discusión: Los tres lotes cumplieron con los criterios internos establecidos para gángliósidos y proteínas (˃0,3 mg/mL), al igual que la relación entre ellos (0,4-1,33). Las fracciones del gradiente variaron en las proporciones gangliósido/proteína.
Conclusiones: Las mayores pérdidas ocurrieron en la ultracentrifugación. Las nanopartículas no fueron homogéneas en cuanto a la relación gangliósidos/proteína.
Palabras clave: N-acetil-gangliósido M3 (NAcGM3)/VSSP, ácido siálico, Lowry, gangliósidos/proteínas.