Ponente
Descripción
Introducción: La purificación del antígeno de la Hepatitis B es fundamental en la producción de vacunas recombinantes como Heberbiovac. La transferencia tecnológica (analítica-productiva) requiere homologar parámetros como la capacidad de elución y % de recobrado. Objetivo: Evaluar de forma comparativa las escalas de purificación del antígeno por Cromatografía de Inmunoafinidad, identificando factores que afectan su equivalencia y optimizando los parámetros a pequeña escala para mejorar el proceso cromatografico. Materiales y Métodos: Se utilizó una matriz de Sepharosa con anticuerpo monoclonal CB.HEP-1 de ratón. Los primeros experimentos se realizaron en una columna analítica de 5 cm de altura y 3,93 ml y una matriz de producción de 30 cm de altura y 16 L. En ambas se aplicó el mismo antígeno a un flujo lineal constante de 150 cm̸h y un tampón fosfato de pH 7. Se calcularon la capacidad de elución y el % de recobrado. En la etapa de optimización a escala analítica se realizaron 7 experimentos incrementando la altura del gel y disminuyendo el tiempo de residencia del antígeno. Resultados: Los resultados de recobrado y capacidad de elución difieren: 44,99 % (Laboratorio) contra 39,38 % (Producción), p=0,023, capacidad productiva (0,041) y capacidad analítica (0,065). Conclusiones: No se logra la homologación, pero se identificaron como factores críticos: el tiempo de aplicación del antígeno, saturación de la matriz y la degradación del ligando. Cambiar el tiempo de residencia en laboratorio mejoro la capacidad hasta 0,107 mg y el recobrado con 49,29 % mostrando un avance en la optimización del proceso de purificación.